本文阅读简介：

  • 1、动物活体成像
  • 2、原位杂交的原理是什么?有何用途
  • 3、原位杂交的意义
  • 4、谁知道原位杂交怎么做?
  • 5、简述原位杂交的步骤。

动物活体成像

1、小动物活体成像 主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。生物发光是用荧光素酶（Luciferase）基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP， Cyt及dyes等）进行标记。

2、小动物活体成像技术是采用高灵敏度制冷 CCD 配合特制的成像暗箱和图像处理软件，使得可以直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。

3、小动物活体成像可以看血流分布。利用灵敏的活体成像系统最少可以看到皮下的500个细胞，当然，由于发光源在老鼠体内深度的不同可看到的最少细胞数是不同的。

4、在拥有激发光多光谱分析功能的活体成像系统出现以前，科学家们被迫采取各种方法来减少动物自发荧光，比如：采用无荧光素鼠粮饲养小鼠、使用裸鼠等。

原位杂交的原理是什么?有何用途

原位杂交术可在原位检测细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达，有很高的敏感性和特异性，已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

原位杂交：原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。

荧光原位杂交技术的原理 荧光，又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。

原理 FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。

简单点说，就是用一段标记了的DNA，去找他原来对应的染色体位置，确定DNA在染色体上的物理位置。荧光技术也可以用于原位杂交，不同的方法罢了，对应同位素法原位杂交等。

原位杂交的意义

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统。

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

原位杂交是在分子生物学领域应用极为广泛的实验技术之一，是在研究生物体发育过程中的一种极为重要的分子遗传学的研究方法。

有意义，虽然一般的审稿人对蛋白表达更认组化的数据，因为组化检测的是蛋白，而原位杂交检测的是核酸，但如果做的比较冷门的蛋白，为了证明抗体识别是正确的也做一个原位杂交也没问题，只要探针做好很快就可以出结果。

原位杂交不需从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，在临床应用上有独特的意义。近年来液相杂交技术有所发展。

而原位杂交是经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交。因此原位杂交可以确定探针的互补序列在胞内的空间位置，这一点具有重要的生物学和病理学意义。

谁知道原位杂交怎么做?

1、我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者，以地高辛标记探针，然后用酶联抗体的方法进行检测。

2、预杂交和杂交 滴加预杂交液于载玻片上，然后置于湿盒中，50℃预杂交2小时。弃去预杂交液，立即滴加杂交液，置于湿盒中52℃杂交过夜。杂交后处理 杂交完，以后的步骤不必要特意防RNA酶。

3、原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。另有荧光原位杂交。

4、） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。 预杂交1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。2）用等体积的HYB 取代HYB－。3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

5、实验方法原理：FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。

6、以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。

简述原位杂交的步骤。

预杂交和杂交 滴加预杂交液于载玻片上，然后置于湿盒中，50℃预杂交2小时。弃去预杂交液，立即滴加杂交液，置于湿盒中52℃杂交过夜。杂交后处理 杂交完，以后的步骤不必要特意防RNA酶。

我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者，以地高辛标记探针，然后用酶联抗体的方法进行检测。

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。另有荧光原位杂交。

由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程在湿盒中进行。 洗脱 此步骤有助于除去非特异性结合的探针，从而降低本底。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。

浸入乙酸酐和三乙醇胺中以减低静电效应，减少探针对组织的非特异性背景染色。将组织切片浸入预杂交液中可达到封闭非特异性杂交点的目的，从而减低背景染色。预杂交液和杂交液的区别在于前者不含探针和dextran sulphate。